干貨|熒光分光光度計的原理及應用

一、熒光分光光度法原理

1. 分子熒光的產生

（1）電子激發態的多重度
單重激發態S：電子自旋方向和處于基態軌道的電子配對。

三重激發態T：電子自旋方向和處于基態軌道的電子平行。

（2）分子能級與躍遷

基態(S0)→激發態(S1、S2激發態振動能級)：吸收特定頻率的輻射。
激發態→基態：多種途徑和方式；速度最快、激發態壽命最短的途徑占優勢；

2. 激發光譜與熒光光譜

（1）熒光的激發光譜曲線
固定測量波長(選最大發射波長),化合物發射的熒光(磷光)強度與激發光波長的關系曲線 （圖中曲線I ） 。激發光譜曲線的最高處，處于激發態的分子最多，熒光強度最大；

（2）熒光光譜

固定激發光波長, 化合物發射的熒光強度與發射光波長關系曲線(圖中曲線II)。問題：熒光(磷光)的激發光波長如何選擇？Stokes位移：激發光譜與發射光譜之間的波長差值。發射光譜的波長比激發光譜的長。

3. 熒光強度和溶液濃度的關系

（1）定量依據

4. 熒光、磷光分析方法的特點

（1）靈敏度高

比紫外-可見分光光度法高2～4個數量級；為什么？

分光光度法所檢測的是兩個較大的信號的微小差別，熒光光度法檢測的是很小背景值上的熒光強度。

（2）選擇性強

既可依據特征發射光譜，又可根據特征吸收光譜；

（3）試樣量少

（4）可提供比較多的物理參數

?缺點：應用范圍小。

二、熒光分光光度計的組成

測量熒光的儀器主要由四個部分組成：激發光源、樣品池、雙單色器系統、檢測器。特殊點：有兩個單色器，光源與檢測器成直角。基本流程如圖：
單色器：選擇激發光波長的第一單色器和選擇發射光(測量)波長的第二單色器；
光源：氙燈和高壓汞燈，染料激光器
檢測器：光電倍增管

三、熒光分析法的應用

1. 無機化合物的分析

與有機試劑配合物后測量；可測量約60多種元素。

鈹、鋁、硼、鎵、硒、鎂、稀土常采用熒光分析法；

氟、硫、鐵、銀、鈷、鎳采用熒光熄滅法測定；

銅、鈹、鐵、鈷、鋨及過氧化氫采用催化熒光法測定；

鉻、鈮、鈾、碲采用低溫熒光法測定；

鈰、銪、銻、釩、鈾采用固體熒光法測定

2. 生物與有機化合物的分析，見表 ：

本文轉自百度文庫D粇，鏈接：https://wenku.baidu.com/view/fc59a757bed5b9f3f90f1c9f.html。

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