Nat. Mater. 表面增強拉曼散射對細菌交流進行檢測及成像
引語:表面增強拉曼散射(SERRS)可以實現單分子檢測,但是在復雜的生理環境中經常包含成百上千種分子,這些分子會對目標分子產生干擾,因此直接在生理環境下檢測目標分子還困難重重。
在自然界中大部分細菌是以生物膜(biofilm)的形式存在的,當浮游細菌粘附在物質表面后會逐漸形成菌落,這時細菌會大量分泌胞外聚合物,胞外聚合物達到一定量的時候就會將細菌完全包裹起來,對細菌起到保護的作用。生物膜的形成使得細菌的生存能力極大提高,對抗生素具有很強的抵抗能力,這對治療由細菌感染引起的疾病來說是很大的挑戰。
細菌在生物膜中是通過群體感應調節(QS)來交流的,它們會分泌一種被稱為自誘導物質的信號分子,其它細菌通過接收這些信號分子就能得到有關它們周圍環境和細菌密度的信息,從而通過調節自身基因的表達產生一系列生理反應,如細胞分化、產生抗體、產生毒性等。QS與細菌的致病能力息息相關,因此分析QS的作用機理是非常重要的。
表面增強拉曼散射(SERS,SERRS是SERS中的一種)技術經常被用來進行分子分析,它的靈敏度可以達到單分子檢測,但是在復雜的生理條件下,特定分子的信號經常會被其它分子的信號干擾,使SERRS的應用受到限制。
最近西班牙維戈大學的Gustavo Bodelón(通訊作者)和 Luis M. Liz-Marzán(通訊作者)等人設計了一種可以原位觀察QS信號代謝物的傳感器,實現了對綠濃桿菌分泌物綠膿菌素(Pyocyanin)的檢測。他們將三種不同結構的金納米顆粒分別包裹在多孔的物質中,然后在多孔物質的表面生長生物膜,生物膜的分泌物可以通過多孔物質到達金納米顆粒的表面而發出SERRS信號,這樣無需破壞生物膜就能對其觀察,加上多孔物質中的孔只允許小分子通過,大大減少了干擾的信號。
圖1 三種不同的SERS傳感器。
(a,b)水凝膠包裹金納米棒;(c,d)介孔TiO2薄膜包裹Au@TiO2納米顆粒; (e,f)介孔SiO2薄膜包裹Au@SiO2超晶格。
圖2 綠膿菌素的拉曼和SERS光譜 (a)綠膿菌素溶液;(10-14M)的紫外-可見-近紅外光吸收光譜以及其分子結構; (b)在固態和溶液(1μM)中拉曼和SERRS的光譜;(c)不同濃度綠膿菌素溶液的SERRS光譜(從下到上分別為0.1nM、1nM、10nM、... 、100μM);(d)SERRS強度與綠膿菌素濃度的關系,圓圈、三角形、正方形分別代表水凝膠包裹金納米棒、Au@TiO2、Au@SiO2。
圖3 用水凝膠包裹金納米顆粒傳感器得到的浮游PA14(綠濃桿菌的一種)分泌吩嗪的光譜。
(a)商業(PYO)、野生型分泌綠膿菌素(WT)和不分泌吩嗪的PA14(Δphz)的SERRS光譜;(b)野生型細菌以及phz變種細菌的SERRS光譜;(c)培養時間與SERRS強度的關系;(d)PA14的生長曲線以及相應的綠膿菌素的濃度曲線。
圖4 用水凝膠包裹金納米顆粒傳感器原位觀察PA14生物膜分泌綠膿菌素。
(a)細菌濃度與時間的關系;(b)不同時間的SERRS光譜;(c)生物膜的光學圖片;(d)c圖中相應黑點的SERRS強度;(e)圖c中紅色星號的地方SERRS強度與到表面距離的關系;(f)探測小鼠體內綠膿菌素的圖片;(g)皮膚下綠膿菌素濃度濃度與SERRS強度的關系。
圖5 用Au@TiO2傳感器原位檢測PA14生物膜分泌綠膿菌素。(a)生物膜(中間黑色部分)的光學圖片(紅色的為該區域的SERRS強度);(b)a中相應的SERRS強度;(c)生物膜的SEM圖。
圖6 用Au@SiO2原位檢測PA14分泌。(a)SEM圖;(b)不同生長時間的SERRS圖;(c)不同時間的SERRS的相對強度;(d)基底的光學圖片,中間為相應的SERRS圖片;(e,f)生長20h后不同放大倍數下的SEM圖片。
小結:作者巧妙的利用多孔材料來覆蓋金納米顆粒,大大減少了其它分子對SERRS信號的干擾,并且直接在多孔材料的表面生長生物膜,使得他們可以在不破壞生物膜的條件下原位觀察細胞的分泌。這種方法不僅可以幫助人們研究QS相關問題,還能在用來研究其它細胞的交流過程。
文獻鏈接:Detection and imaging of quorum sensing in Pseudomonas aeruginosa biofilm communities by surface-enhanced resonance Raman scattering(Nat. Mater.,2016, DOI: 10.1038/NMAT4720)
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